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淺析反相色譜柱使用和維護(hù)

更新時(shí)間:2021-12-29      點(diǎn)擊次數(shù):1902
  反相色譜柱是我們應(yīng)用廣泛的色譜柱類型,反相色譜柱鍵合相主要包括:C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。對(duì)于以上色譜柱,我們?cè)谑褂眉熬S護(hù)的時(shí)候可以按照同樣的操作方式:
  1、在條件允許情況下,在使用前最好對(duì)新色譜柱按照說明書方法進(jìn)行柱效測(cè)試。以確保色譜柱的正常。
  2、所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于60℃。
  3、樣品
  最好將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫,則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,最好使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑(例如,流動(dòng)相為水,樣品溶劑為甲醇),為達(dá)到較好峰形,需要降低進(jìn)樣量(以250x4.6mm規(guī)格為例,小于10μL)。
  4、流動(dòng)相
  所有流動(dòng)相,特別是含有緩沖鹽的流動(dòng)相,反相色譜柱最好當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制;如果使用了前日配制的流動(dòng)相,請(qǐng)確保流動(dòng)相pH值沒有變化,并確保流動(dòng)相沒有長菌。流動(dòng)相的pH值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內(nèi)使用。請(qǐng)盡量避免在常規(guī)流動(dòng)相中使用很高比例的水(>95%)作為流動(dòng)相,可能會(huì)造成保留時(shí)間的不穩(wěn)定或者色譜柱鍵合相的損害。如果使用高比例水或者100%水相為流動(dòng)相,建議使用親水柱。
  5、色譜柱平衡
  在進(jìn)行分析之前,請(qǐng)使用至少20倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱,以使色譜柱達(dá)到平衡。
  色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算:
  V=0.68πr2
  V為色譜柱柱體積(mL),r為色譜柱內(nèi)徑(cm),L為色譜柱長度(cm)。
  6、色譜柱保護(hù)
  對(duì)于“臟”的樣品以及組分未知的樣品,請(qǐng)盡量使用在線濾器或保護(hù)柱,如果可能,使用SPE小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。
  7、色譜柱清洗
  常規(guī)清洗:
  在儲(chǔ)存反相色譜柱之前,請(qǐng)使用至少20倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱(去除緩沖鹽),再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱(去除強(qiáng)保留成分,反相色譜通常使用甲醇或乙腈),然后使用合適的溶劑儲(chǔ)存色譜柱。
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